التنسيل المورثي والتعبير البروتيني عن الشكل ثنائي القسيم من بروتين الأنكسين V البشري المؤشب

الملخص

يستعمل بروتين الأنكسين V المؤشب بصورة شائعة كواسم هام للكشف عن عملية الموت الخلوي المبرمج، حيث يرتبط بألفة عالية بجزيئات الفوسفاتيديل سيرين وذلك بوجود شوارد الكالسيوم. هدفت هذه الدراسة إلى تصميم نظام جديد للتعبير البروتيني عن الأنكسين V بصورة مندمجة مع مجال البلمرة hCH3 من أجل الحصول عليه بشكل ثنائي قسيم. وقد تَضَمّن ذلك بناء بلازميد pRSET-hCH3-ANXV من خلال تنسيل مورثة hCH3 مع واسم سداسي الهستيدين من النهاية الأمينية لمورثة الأنكسين V، وتحت سيطرة المُحَضِض T7. تم التعبير عن بروتين CH3-ANXV في الاشريكية القولونية، ونُقِي من سيتوبلاسما هذه البكتريا باستعمال كروماتوغرافيا الألفة المعدنية، وتم التأكد من ذلك بالرحلان الكهربائي وكذلك بالكشف عنه في اختبارات المقايسة المناعية الإنزيمية والتبصيم النقطي والمناعي باستعمال أضداد نوعية لبروتين الأنكسين V. سيوفر بروتين الأنكسين V ثنائي القسيم وسيلة فعالة لربط الفوسفاتيديل سيرين بألفة عالية، كما يمكن توظيفه بعد وسمه بالفلوريسين كأداة جزيئية سريعة وحساسة للكشف عن الفوسفاتيديل سيرين المعروض إما على أغشية الخلايا الداخلة في الموت الخلوي المبرمج أو الحويصلات الغشائية.